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細(xì)胞破碎的原理與技術(shù)

更新時間:2020-12-25      點擊次數(shù):2651
 高壓均質(zhì)機是由一個高壓柱塞泵及特殊結(jié)構(gòu)的均質(zhì)閥組成,需處理的物料在柱塞所造成的高壓條件下進入可調(diào)節(jié)壓力大小的閥組中,失壓后的物料從可調(diào)節(jié)限流縫隙中以*的流速(1000米/秒,可達(dá)1500米/秒)噴出,撞在閥組件之一的沖擊環(huán)上 保持細(xì)胞活性的重要參數(shù)是溫度和時間,物料在高壓均質(zhì)閥內(nèi)部的約0.01秒的瞬間,在高壓的作用下溫度會上升到大約10~15℃。
通過均質(zhì)閥后在經(jīng)過高效換熱器的作用下,溫度在2~3秒作用會迅速下降,所以物料在溫度相對較高的條件下僅僅維持多3秒鐘。 滲透壓沖擊破碎法(osmotic shock) 滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,將細(xì)胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),由于滲透壓的作用,細(xì)胞內(nèi)水分便向外滲出,細(xì)胞發(fā)生收縮,當(dāng)達(dá)到平衡后,將介質(zhì)快速稀釋,或?qū)⒓?xì)胞轉(zhuǎn)入水或緩沖液中,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內(nèi),引起細(xì)胞快速膨脹而破裂。 凍融破碎法(freezing and thawing) 將細(xì)胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,反覆多次而達(dá)到破壁作用。由于冷凍,一方面能使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂,從而增加細(xì)胞的親水性能,另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶,形成冰晶粒,引起細(xì)胞膨脹而破裂。對于細(xì)胞壁較脆弱的菌體,可采用此法。 酶溶破碎法(enzyme lysis) 酶解是利用溶解細(xì)胞壁的酶處理菌體細(xì)胞,使細(xì)胞壁受到部分或*破壞后,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細(xì)胞膜,進一步增大胞內(nèi)產(chǎn)物的通透性。溶菌酶(lysozyme)適用于革蘭氏陽性菌細(xì)胞的分解,應(yīng)用于革蘭氏陰性菌時,需輔以EDTA使之更有效地作用于細(xì)胞壁。 真核細(xì)胞的細(xì)胞壁不同于原核細(xì)胞,需采用不同的酶。 化學(xué)破碎法(chemical treatment) 采用化學(xué)法處理可以溶解細(xì)胞或抽提胞內(nèi)組分。常用酸、堿、表面活性劑和有機溶劑等化學(xué)試劑 去垢劑破碎法(detergents)